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本核酸内切酶VIII来自大肠杆菌，是表达、纯化获得的重组内切酶。核酸内切酶VIII是一种DNA损伤修复酶，具有N-糖基化酶(N-glycosylase)活性和AP裂解酶(AP-lyase)活性。核酸内切酶VIII的N-糖基化酶活性能切下并释放双链DNA上受损的嘧啶碱基(Pyrimidines)从而产生一个脱嘌呤(Apurinic,AP)位点；核酸内切酶VIII的AP裂解酶活性，可以切割AP位点的3'和5'端，从而切除AP位点，产生一个具有3'和5'磷酸的碱基缺口(Gap)。

核酸内切酶VIII可以识别并切除的受损碱基包括：Urea、5,6-dihydroxythymine (5,6-二羟基胸腺嘧啶)、Thymine glycol (胸腺嘧啶乙二醇)、5-hydroxy-5-methylhydantoin (5-羟基-5-甲内酰脲)、Uracil glycol (尿嘧啶乙二醇)、6-hydroxy-5,6-dihydrothymine (6-羟基-5,6-二氢胸腺嘧啶)和Methyltartronylurea (甲基羟丙二酰脲)。虽然核酸内切酶VIII与Endonuclease III相似，但核酸内切酶VIII具有β和δ裂解酶活性，而Endonuclease III仅具有β裂解酶活性。

可用于DNA损伤和修复研究；单细胞凝胶电泳；碱洗脱；碱解螺旋；识别并切除双链DNA上受损的嘧啶碱基；切割AP位点的3'和5'端而产生一个具有3'和5'磷酸的碱基缺口(Gap)。


本制品识别并切除双链DNA上受损碱基的原理请参考图1。

图1．核酸内切酶VIII识别并切除双链DNA上受损碱基的示意图。核酸内切酶VIII识别双链DNA上受损碱基并在其N-糖基化酶活性作用下切除双链DNA上受损的嘧啶碱基，产生一个脱嘌呤(AP)位点；随后在其AP裂解酶活性作用下切割AP位点的3'和5'端切除AP位点，产生一个具有3'和5'磷酸的碱基缺口。


核酸内切酶VIII催化酶切含AP位点双链DNA的效果请参考图2。

图2．本制品和国外N公司的同类产品催化切除含AP位点双链DNA的效果图。在20μL反应体系中加入图中指定量的本制品或N公司的核酸内切酶VIII，37℃孵育30分钟进行损伤位点切除反应，反应完毕后立即放至冰上，并加入2×RNA上样缓冲液(货号：YTB0215)，随后用TBE-Urea PAGE预制胶(15%)进行电泳分析，最终进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示，本制品与N公司的竞品相比，具有类似的催化效果。反应体系(20μL)：10mM Tris-HCl,75mM NaCl,1mM EDTA,pH8@25℃,20pmol含AP位点的双链DNA以及不同浓度的核酸内切酶VIII。含AP位点的双链DNA的制备方法：将含dU碱基的DNA 1 (31nt)和正常的DNA 2 (27nt)按照DNA寡核苷酸退火缓冲液(货号：YT483)说明书中的使用方法通过梯度降温退火形成双链DNA；随后使用UDG酶(货号：YTB4034)/细菌热敏型UDG酶(货号：YTB4035)/鳕鱼热敏型UDG酶(货号：YTB4036)催化含尿嘧啶的DNA链中的尿嘧啶(dU)碱基和脱氧核糖之间的N-糖苷键发生水解，从而释放游离尿嘧啶产生含AP位点的双链DNA。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

组分	1kU	5kU	20kU
核酸内切酶VIII(10U/μL)	100μL	500μL	2mL
10×Endo VIII Buffer	400μL	2mL	8mL

保存：-20℃，有效期2年。


10mM Tris-HCl，250mM NaCl，0.1mM EDTA，1mM DTT，50% (v/v) Glycerol，pH8.0@25℃。


10×Endo VIII Buffer：
100mM Tris-HCl，750mM NaCl，10mM EDTA，pH8.0@25℃。


大于95%，无DNA内切酶和其他外切酶活性，无RNA酶活性。


75℃加热10分钟可使核酸内切酶VIII失活。

• 本制品中在使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
  
• 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 使用核酸内切酶VIII切除双链DNA中的AP位点
  
  • 双链DNA的制备：使用DNA寡核苷酸退火缓冲液(货号：YT483)使单链DNA (中间含有一个或多个脱氧尿嘧啶碱基)和其互补链DNA (中间不含有脱氧尿嘧啶碱基)退火形成双链DNA。
    
  • 含AP位点双链DNA的制备：使用UDG酶/细菌热敏型UDG酶/鳕鱼热敏型UDG酶处理退火双链DNA，生成含有AP位点的双链DNA。
    
  • 切除双链DNA中的含AP位点的：
    
    • 参考下表在冰浴中配制反应体系。
      

      成分	用量
      无菌无酶超纯水	15μL
      10×Endo VIII Buffer	2μL
      dsDNA with AP site(10μM/μL)	2μL
      核酸内切酶VIII(10U/μL)	1μL

      
      注：请把除核酸内切酶VIII以外的组分充分混匀后再加入核酸内切酶VIII，加入核酸内切酶VIII后可以用移液器吹打混匀。如果待酶切DNA量较大，可以适当延长酶切时间或按比例放大酶切体系。
      
    • 反应条件：37℃，30分钟。
      
    • 终止反应：75℃加热10分钟，或者冰浴孵育1～2分钟并加入2×RNA上样缓冲液(货号：YTB0215)。
• 其它应用请参考相关文献进行。

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